Proteína L
La Proteína L se aisló primero de la superficie de la especie bacteriana Peptostreptococcus magnus y se descubrió que se unía a las inmunoglobulinas a través de la interacción de la cadena L, de donde se sugirió el nombre.
Consiste en 719 residuos de aminoácidos. El peso molecular de la proteína L purificada de las paredes celulares de Peptostreptoccus magnus se estimó primero como 95kD por SDS-PAGE en presencia del agente reductor 2-mercaptoetanol, mientras que el peso molecular se determinó a 76kD por cromatografía en gel en presencia de 6 M de guanidina HCl.
La proteína L no contiene ningún bucle de disulfuro entre cadenas, ni consiste en subunidades unidas por disulfuro. Es una molécula ácida con un pI.de 4.0. A diferencia de la Proteína A y la Proteína G, que se unen a la región Fc de las inmunoglobulinas ( anticuerpos ), la proteína L se une a los anticuerpos a través de las interacciones de la cadena ligera.
Dado que ninguna parte de la cadena pesada está involucrada en la interacción de unión, la proteína L se une a un rango más amplio de clases de anticuerpos que la proteína A o G. La proteína L se une a representantes de todas las clases de anticuerpos, incluyendo IgG, IgM, IgA, IgE e IgD. Los fragmentos variables de cadena sencilla ( scFv ) y los fragmentos Fab también se unen a la proteína L.
A pesar de este amplio rango de unión, la proteína L no es una proteína de unión a anticuerpos universal. La unión a la proteína L está restringida a aquellos anticuerpos que contienen cadenas ligeras kappa. En humanos y ratones, la mayoría de las moléculas de anticuerpos contienen cadenas ligeras kappa (κ) y el resto tiene cadenas ligeras lambda (λ).
La proteína L solo es efectiva en la unión de ciertos subtipos de cadenas ligeras kappa. Por ejemplo, se une a los subtipos humanos VκI, VκIII y VκIV, pero no se une al subtipo VκII. La unión de inmunoglobulinas de ratón está restringida a aquellos que tienen cadenas ligeras VκI.
Dados estos requisitos específicos para una unión efectiva, la aplicación principal para la proteína L inmovilizada es la purificación de anticuerpos monoclonales de ascitis o sobrenadante de cultivo celular que se sabe que tienen la cadena ligera kappa. La proteína L es extremadamente útil para la purificación de anticuerpos monoclonales que contienen VLκ del sobrenadante de cultivo porque no se une a las inmunoglobulinas bovinas, que a menudo están presentes en los medios como un suplemento de suero.
Además, la proteína L no interfiere con el sitio de unión al antígeno del anticuerpo, por lo que es útil para los ensayos de inmunoprecipitación, incluso utilizando IgM.
Gen para la proteína L
El gen para la proteína L contiene cinco componentes: una secuencia señal de 18 aminoácidos; una región terminal NH (“A”) de 79 residuos; cinco repeticiones “B” homólogas de 72-76 aminoácidos cada una; una región terminal de COOH de dos repeticiones “C” adicionales (52 aminoácidos cada una); una región hidrofílica, putativa, que atraviesa la pared celular (“W”) después de que se repite la C;
Un ancla de membrana hidrofóbica (“M”). Se encontró que las repeticiones B (36 kD) eran responsables de la interacción con las cadenas ligeras de Ig.
Otras proteínas de unión a anticuerpos
Además de la proteína L, otras proteínas bacterianas que se unen a la inmunoglobulina, como la proteína A, la proteína G y la Proteína A / G, se usan comúnmente para purificar, inmovilizar o detectar inmunoglobulinas. Cada una de estas proteínas de unión a inmunoglobulina tiene un perfil de unión a anticuerpos diferente en términos de la porción del anticuerpo que se reconoce y la especie y tipo de anticuerpos que se unirá.